Bioss 抗體的使用和保存方法
抗體,無論是保存還是運輸,都要避免反復凍融。反復凍融,冰晶會破壞抗體的空間結構,導致蛋白變性形成多聚體,從而降低抗體的結合能力,也加快了抗體球蛋白的降解速度。抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果,如果抗體保存得當,Bioss的抗體活性大部分都可以維持數年。下面就給大家講解下,Bioss抗體的使用和保存方法:
一、收到抗體后的操作
收到Bioss抗體后(大部分抗體是溶液態),請務必在 4℃,12000rpm,離心3分鐘,再打開管蓋進行分裝、溶解和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至5 分鐘,以保證全部抗體均離心下來,干粉狀態的同樣適用)。Bioss抗體使用特制的儲存管,只有在12000rpm 離心3分鐘,才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下來(即使是在10000rpm離心也會離心不完全,導致出現抗體的量不足的現象)。請按照說明書推薦的保存條件正確保存和使用抗體。
二、抗體的長期保存
對于Bioss大部分抗體,比較合適的保存方式是:分裝后保存在-20℃或者-80℃。
(1)對絕大多數Bioss抗體來說,保存在-20℃就完全足夠了。
(2)分裝可以最大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
(3)分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響。
(4)復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來。
(5)抗體工作液應該當天配制當天用完,4℃保存盡量不要超過1天。
三、抗體的短期保存
大部分Bioss抗體,在4℃短暫保存1~2 周對抗體活性沒有影響。如果抗體很快會使用(1~2 周內),推薦在4℃保存,這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害,如果要長期保存,則最好是在-20℃或者-80℃。最關鍵的一點是要根據說明書推薦的方式來正確的保存抗體。腹水形式的抗體產品請在收到后立即凍起來,因為該類產品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會導致抗體的降解。
四、抗體的運輸條件
一般國內的的運輸過程需要2-5天的時間,是在低溫4℃的條件下來完成的。 4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程),所以抗體運輸過程中絕對避免干冰運輸。
五、抗體的穩定性
(1) 抗體的穩定性是自然界長期進化的結果,抗體是免疫系統中最重要的分子之一,其穩定性是自然進化篩選的結果,在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩定的結構。
(2)抗體分子的高Tm值,在室溫下,甚至短時間溫度達到50~60℃,抗體分子都能維持正確折疊,保持其應有的活性。
(3)抗體的純度。Bioss采用先進的抗體純化技術,確保抗體產品的高純度,保障其抗體產品的穩定性。
(4)抗體的濃度。高濃度的抗體產品可減少容器表面吸附造成的物質損失,高濃度的抗體穩定性更好。Bioss大部分抗體濃度為1mg/ml,抗體純度高,特異性好,效價更高。
六、關于加入甘油保存
有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復凍融,甘油在-20℃會降低冰點,這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹慎注意無菌操作,避免污染。
七、關于蛋白保護劑
蛋白在高濃度時更不容易降解(1mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。
八、關于Proclin300的使用
為了防止微生物污染,Proclin300經常被加入到抗體中(終濃度0.03% (w/v))。Bioss的絕大部分抗體已經含有了0.03%的Proclin300,在說明書的儲存緩沖液中有標明。
九、特殊抗體的保存條件
偶聯抗體:所有偶聯抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光 保存,尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的。
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